环状RNA实时定量PCR-LEHU乐虎生物丨数谱生物

    LEHU乐虎

    环状RNA实时定量PCR

    • 简介
    • 服务流程

    •        circRNA是现在科研生命领域新兴的研究热点分子之一。区别于传统的线性RNA，circRNA具有独特的闭合环状结构，使得其对核酸酶不敏感，所以比线性RNA更为稳定，非常适合作为临床诊断标志物（biomarker）。近期研究表明，circRNA主要顺利获得吸附miRNA抑制后者对相应靶基因的调控，称之为竞争性内源RNA（ceRNA），而与疾病相关联miRNA的相互作用说明circRNA对疾病的调控起着非常重要的功能。

      LEHU乐虎生物为您给予一站式的circRNA实时定量PCR技术服务，您只需要给予保存完好的组织或细胞样本，本公司专业技术服务人员就可为您完成circRNA实时定量PCR实验操作和数据分析，给予您完整的实验报告，为你节省大量的时间和精力。

    • 1. 独特的引物设计

             由于circRNA独特的闭合环状结构，在进行实时定量PCR检测的时候需要更为特异的引物设计；针对circRNA特异的back splicing site，引物设计在该位点两侧（如下图），即“外向引物”（区别于线性RNA的内向引物）。



      2. 样品RNA抽提

             a.组织样本：取适量（50-100mg）新鲜组织或正确保存的组织样本，匀浆后用Trizol试剂抽提RNA。

             b.细胞样本：取1×106-1×107细胞，PBS清洗细胞，吸去PBS后用Trizol试剂抽提RNA。

      3. RNA质量检测

             a.紫外线吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值，取得RNA的浓度及并顺利获得  A260/A230及A260/A280的吸收比值判定RNA的纯度；

             b.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。

      4. 逆转录合成cDNA

             利用random primer进行RT反应，合成cDNA。

      5. 实时定量PCR

             以合成的cDNA作为模版进行实时定量PCR扩增；同时检测每个样本中内参基因的表达量，校正上样误差。

      6. 分析结果、给予实验报告

             分析实时定量PCR结果，给予实验报告，包括详细的实验方法、实时定量PCR实验数据和图表。